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噬菌體篩選的相關(guān)知識(shí)點(diǎn)介紹

更新時(shí)間:2022-07-15點(diǎn)擊次數(shù):1193
  將編碼多肽的外源DNA片段與噬菌體表面蛋白的編碼基因融合(插入信號(hào)肽與衣殼蛋白基因間)后,以融合蛋白的形式呈現(xiàn)在噬菌體的表面,每個(gè)噬菌體只含1個(gè)外源基因,被展示的多肽或蛋白可保持相對(duì)的空間結(jié)構(gòu)和生物活性,展示在噬菌體的表面。導(dǎo)入了各種各樣外源基因的一群噬菌體,就構(gòu)成一個(gè)展示各種各樣外源肽的噬菌體展示庫(kù)。
 
  噬菌體篩選展示局限性:
 
  1、肽庫(kù)容量受大腸桿菌轉(zhuǎn)化效率影響,容量一般在109,高于此限制的較多基因?qū)㈦y以表達(dá);
 
  2、編碼多肽的基因帶有一定的密碼子偏愛性,限制了肽庫(kù)的復(fù)雜度;
 
  3、噬菌體宿主大腸桿菌的生物合成系統(tǒng)有自身的限制因素,如缺乏氨基酸修飾、蛋白糖基化、不能合成D型氨基酸。
 
  4、在噬菌體展示過程中必須經(jīng)過細(xì)菌轉(zhuǎn)化、噬菌體包裝,有的展示系統(tǒng)還要經(jīng)過跨膜分泌過程,這就限制了所建庫(kù)的分子多樣性。
 
  5、不是所有的序列都能在噬菌體中獲得很好的表達(dá),因?yàn)橛行┑鞍踪|(zhì)功能的實(shí)現(xiàn)需要折疊、轉(zhuǎn)運(yùn)、膜插入和絡(luò)合,導(dǎo)致在體內(nèi)篩選時(shí)需外加選擇壓力。
 
  噬菌體篩選從HBx(肝癌相關(guān)抗原)單抗細(xì)胞中克隆重鏈可變區(qū)基因,重組入M13噬菌體,驗(yàn)證表達(dá)產(chǎn)物具有活性,然后表達(dá)出單鏈抗體、單域抗體或嵌合抗體,為肝癌導(dǎo)向治療研究提供基礎(chǔ)。為解決非典型嗜血流感桿菌毒力因子表面蛋白混合寡糖LOS制備疫苗遇到的免疫原型弱的問題,用兔抗LOS篩選肽庫(kù),得到4個(gè)一致性序列,其中3個(gè)與兔抗親和力高。用篩選得到的3個(gè)高親和力肽免疫兔得到的抗體對(duì)染病小鼠模型具有抗體保護(hù)性作用。
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