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Southern blot(非放射性標(biāo)記)

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Southern blot 是檢測(cè)DNA樣品中是否含有目的DNA的片段的技術(shù)。將凝膠電泳分離得到的DNA的片段轉(zhuǎn)移到膜上,并采用探針雜交法檢測(cè)目的DNA的存在。在遺傳病診斷、DNA圖譜分析及PCR產(chǎn)物分析等方面有重要價(jià)值。

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更新時(shí)間:2020-05-14
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Southern blot 是檢測(cè)DNA樣品中是否含有目的DNA的片段的技術(shù)。將凝膠電泳分離得到的DNA的片段轉(zhuǎn)移到膜上,并采用探針雜交法檢測(cè)目的DNA的存在。在遺傳病診斷、DNA的圖譜分析及PCR產(chǎn)物分析等方面有重要價(jià)值。

 

Southern印跡雜交技術(shù)包括兩個(gè)主要過(guò)程:一是將待測(cè)定核酸分子通過(guò)一定的方法轉(zhuǎn)移并結(jié)合到一定的固相支持物(硝酸纖維素膜或尼龍膜)上,即印跡(blotting);二是固定于膜上的核酸與同位素標(biāo)記的探針在一定的溫度和離子強(qiáng)度下退火,即分子雜交過(guò)程。

 

操作流程如下:

1.        限制性酶切將DNA切割成小片段

2.        電泳法分離DNA的片段。

3.        將DNA從凝膠轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜或PVDF上

4.        確認(rèn)DNA轉(zhuǎn)移是否*

5.        UV法將DNA固定到膜上

6.        探針的非放射性標(biāo)記(生物素?;ǎ?/span>

7.        進(jìn)行探針和膜的雜交

8.        根據(jù)標(biāo)記的探針的特性,進(jìn)行探針檢測(cè)和對(duì)結(jié)果的分析

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